微量超聲波處理器,VCX 130PB:具有拇指式脈沖發(fā)生器或腳踏開關(guān)，用于安全處理各種有機(jī)和無機(jī)材料，從150微升到150毫升。典型應(yīng)用包括生物技術(shù)和藥物加工，包括混合，分散和樣品制備用途。

◆能量監(jiān)視器

◆數(shù)字電表

◆自動調(diào)諧

◆拇指式脈沖發(fā)生器

◆遠(yuǎn)程處理能力

◆可變功率輸出控制

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、了解超聲細(xì)胞破碎的基本原理

2、掌握超聲細(xì)胞破碎的基本技術(shù)

實(shí)驗(yàn)原理

強(qiáng)聲波作用溶液時(shí)，氣泡產(chǎn)生、長大和破碎的空化現(xiàn)象有關(guān)，空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪刀力使細(xì)胞裂解。

材料和試劑

細(xì)菌10ml、燒杯、刨冰、75％酒精棉球。

細(xì)胞破碎的方法:

一、機(jī)械破碎法：是指利用搗碎機(jī)、研磨器或勻漿器 等將細(xì)胞破碎開來 。

1. 高速組織搗碎：將材料配成稀糊狀液，放置于筒內(nèi)約1/3體積，蓋緊筒蓋，將調(diào)速器先撥至最慢處，開動開關(guān)后，逐步加速至所需速度。此法適用于動物內(nèi)臟組織、植物肉質(zhì)種子等。

2. 玻璃勻漿器勻漿：先將剪碎的組織置于管中，再套入研桿來回研磨，上下移動，即可將細(xì)胞研碎，此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高，適用于量少和動物臟器組織。

二、物理破碎法：指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細(xì)胞破碎開來。

1：用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂(借助超聲的震動力破碎細(xì)胞壁和細(xì)胞器）。

機(jī)制：可能與強(qiáng)聲波作用溶液時(shí)，氣泡產(chǎn)生、長大和破碎的空化現(xiàn)象有關(guān)，空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪刀力使細(xì)胞裂解。

超聲波破碎的效率取決于聲頻、聲能、處理時(shí)間、細(xì)胞濃度和細(xì)胞類型等。（使用時(shí)注意降溫，防止過熱）。

2. 高壓破碎：細(xì)胞懸浮液從高壓室的環(huán)狀隙噴射到靜止的撞擊環(huán)上，被迫改變方向經(jīng)出口管流出。此過程中細(xì)胞經(jīng)歷了高速造成的剪切的碰撞及高壓到常壓的變化，從而破碎釋放內(nèi)含物。

這是一種溫和的、徹底破碎細(xì)胞的較理想的方法。

3. 反復(fù)凍融法：將細(xì)胞在-20度以下冰凍，室溫融解，反復(fù)幾次，由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。

三、化學(xué)破碎法：指利用甲醛、丙酮等有機(jī)溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變 。

有些動物細(xì)胞，例如腫瘤細(xì)胞可采用十二烷基磺酸鈉（SDS）、去氧膽酸鈉等細(xì)胞膜破壞。濃度一般為1mg/ml。

四、酶學(xué)破碎法 ：選用合適的酶，使細(xì)胞壁遭到破壞，進(jìn)而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎開來。

細(xì)菌細(xì)胞壁較厚，可采用溶菌酶處理效果更好。

裂解液標(biāo)準(zhǔn)配方: ：50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在這個(gè)pH范圍內(nèi)比較好發(fā)揮作用) 。

綜合敘述：無論用哪一種方法破碎組織細(xì)胞，都會使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中，使大分子生物降解，導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少，加入二異丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或減慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯甲磺酰氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力，但不是全部，而且應(yīng)該在破碎的同時(shí)多加幾次；另外，還可通過選擇pH、溫度或離子強(qiáng)度等，使這些條件都要適合于目的物質(zhì)的提取。

使用前注意事項(xiàng)：

1．根據(jù)所處理的樣本體積選擇適當(dāng)探頭，使用前后均須用酒精棉球擦洗探頭，換探頭須剛專用扳手更換；

2．AMPLITUDE旋鈕打開時(shí)，探頭不得在空氣中暴露，特殊情況下(測試探頭)不應(yīng)超過10秒；

3．使用前準(zhǔn)備好冰盒，樣品處理時(shí)必須置于冰浴中，樣品濃度不可過大。